胚胎干細胞是指來源于著床前囊胚期的內細胞團或早期胚胎原始生殖嵴的原始生殖細胞的一種多潛能細胞。1981年，Evans等利用實驗中獲得的延遲著床的囊胚并從中分離培養獲得了增殖且未分化的小鼠囊胚內細胞團，培養于 STO(一種已建系的小鼠胚胎成纖維細胞)飼養層 上，首次分離得到胚胎干細胞。1998年，Thomson等從體外受精發育至囊胚階段的人胚胎中分離獲得內細胞團，將其接種于小鼠胚胎成纖維細胞飼養層上，經分離培養逐漸形成能長期穩定傳代的人胚胎干細胞，首次成功建立了人胚胎干細胞系。

　　胚胎干細胞是在體外無限增殖、自我更新和多向分化潛能的細胞，這種特性使其在誘導分化、遺傳病防治、器官移植等方面具有前景廣闊的臨床應用價值，同時在新基因的發現、新藥開發、功能基因的組織學研究、致畸實驗等方面也具有廣泛的應用前景。選擇較優化的細胞培養體系對于胚胎干細胞的研究及臨床應用至關重要。飼養層對胚胎干細胞自我更新及全能性的維持起重要作用，目前其機制仍未完全闡明，很大程度上與飼養層所提供的細胞接觸及復雜的蛋白分子環境有關。

　　小鼠胚胎成纖維細胞因其取材方便、易于制備和作用效果好等優點而成為胚胎干細胞培養首選的且較常用的飼養層細胞。

　　小鼠胚胎成纖維細胞飼養層制備：人胚胎干細胞傳代前1d制備飼養層細胞。0.1%明膠水溶液加入培養瓶，覆蓋培養瓶底部包被培養瓶，置37培養箱孵育2h后備用。取細胞融合率約90%的第2-4代小鼠胚胎成纖維細胞，棄原培養液，將2mL含10mg/L絲裂霉素C及體積分數為10%胎牛血清DMEM培養液加入培養瓶，置37培養2h。棄絲裂霉素C，用PBS洗5次，每次2min(動作要輕柔，以免細胞層脫落，必要時可在鏡下觀察細胞層有無脫落)。加入0.25%胰酶2mL消化，加入等體積的含體積分數為10%胎牛血清DMEM培養液中止消化，并用吸管輕輕吹打瓶底，使細胞脫壁。收集消化細胞，800r/min離心5min，棄上清，加含體積分數為10%胎牛血清的DMEM重懸，用血細胞計數板計數。取出經明膠包被培養瓶，棄去明膠水溶液，以5.0×105個/瓶接種細胞，含體積分數為10%胎牛血清的DMEM培養液培養，備用。使用前需換用胚胎干細胞培養液