用大豆酪蛋白瓊脂培養基檢測沉降菌測試方法
方法概述
本測試方法采用沉降法，即通過自然沉降原理收集在空氣中的生物粒子于培養基平皿，經若干時間，在適宜的條件下讓其繁殖到可見的菌落進行計數，以平板培養皿中的菌落數來判定潔凈環境內的活微生物數，并以此來評定潔凈室（區）的潔凈度。
所用的儀器和設備
⑴高壓消毒鍋
使用時應嚴格按照儀器說明書操作。
⑵恒溫培養箱
必須定期對培養箱的溫度計進行檢定。
⑶培養皿
一般采用?90mm×15mm的硼硅酸玻璃培養皿。
⑷培養基
普通肉湯瓊脂培養基或其他藥典認可的培養基。其配制方法見附錄A（標準的附錄）。
測試步驟
⑴采樣方法
將已制備好的培養皿按5.4.1.2的要求放置，打開培養皿蓋，使培養基表面暴露0.5h，再將培養皿蓋蓋上后倒置。
⑵培養
①全部采樣結束后，將培養倒置于恒溫培養箱中培養。
②在30℃～35℃培養箱中培養，時間不少于48h。
③每批培養基應有對照試驗，檢驗培養基本身是否污染。可每批選定3只培養皿作對照培養。
⑶菌落計數
①用肉眼直接計數，標記或在菌落計數器上點計，然后用5～10倍放大鏡檢查，不否遺漏。
②若培養皿上有2個或2個以上的菌落重疊，可分辨時仍以2 個或2個以上菌落計數。
注意事項
⑴測試用具要作滅菌處理，以確保測試的可靠性、正確性。
⑵采取一切措施防止人為對樣本的污染。
⑶對培養基、培養條件及其他參數作詳細的記錄。
⑷由于細菌種類繁多，差別甚大，計數時一般用透射光于培養皿背面或正面仔細觀察，不要漏計培養皿邊緣生長的菌落，并須注意細菌菌落與培養基沉定物的區別，必要時用顯微鏡鑒別。
⑸采樣前應仔細檢查每個培養皿的質量，如發現變質、破損或污染的應剔除。
測試規則
⑴測試狀態
①沉降菌測試前，被測試潔凈室（區）的溫濕度須達到規定的要求，靜壓差、換氣次數、空氣流速必須控制在規定值內。
②沉降菌測試前，被測試潔凈室（區）已經過消毒。
③測試狀態有靜態和動態兩種，測試狀態的選擇必須符合生產的要求，并在報告中注明測試狀態。
⑵測試人員
①測試人員必須穿戴符合環境潔凈度級別的工作服。
②靜態測試時，室內測試人員不得多于二人。
⑶測試時間
①對單向流，如100級凈化房間及層流工作臺，測試應在凈化空調系統正常運行不少于10min后開始。
②對非單向流，如10 000級、100 000級以上的凈化房間，測試應在凈化空調系統正常運行不少于30min后開始。
⑷沉降菌計數
采樣點數目及其布置
②較少采樣點數目
沉降法的較少采樣點數可按表1確定。
表1 較少采樣點數目
在滿足較少測點數的同時，還宜滿足較少培養皿數，見表2。
表2 較少培養皿數
③采樣點的布置
采樣點的位置可以同懸浮粒子測試點。
）工作區采樣點的位置離地0.8m～1.5m左右（略高于工作面）。
）可在關鍵設備或關鍵工作活動范圍處增加采樣點。
采樣點位置的詳細規則見附錄B（標準的附錄）。
⑸記錄
測試報告中應記錄房間溫度、相對濕度、壓差及測試狀態。
測試報告的編寫見附錄C（標準的附錄）。
⑹結果計算
①用計數方法得出各個培養皿的菌落數。
②平均菌落數的計算，見式（1）。
平均菌落數M= ……………（1）
式中：M——平均菌落數；
——1號培養皿菌落數；
——2號培養皿菌落數；
——n號培養皿菌落數；
——培養皿總數。
⑺結果評定
用平均菌落數判斷潔凈室（區）空氣中的微生物。
①潔凈室（區）內的平均菌落數必須低于所選定的評定標準。
②若某潔凈室（區）內的平均菌落數超過評定標準，則必須對此區域先進行消毒，然后重新采樣兩次，測試結果均須合格。
